Comment calculer les titres de virus

Dilutions en série

1. Mettez des gants, remplissez 10 tubes de culture avec 9 ml de bouillon et de les étiqueter "10 ^ -1," "10 ^ -2", "10 ^ -3," et ainsi de suite jusqu'à ce que "10 ^ -10." Ces tubes sont utilisés pour les dilutions en série virales. Depuis virus peuvent se développer à des concentrations incroyablement élevés, vous devez de les diluer afin de les compter effectivement. Chaque tube représente une dilution de dix fois du virus.

2. Prélever 1 ml de la culture de virus que vous souhaitez titrer et le transférer vers le tube intitulé "10 ^ -1" avec une pipette. Mélanger le tube bien. Ceci est votre première dilution de dix fois.

3. Prélever 1 ml de la culture mixte de votre tube étiqueté "10 ^ -1" et les transférer avec une nouvelle pipette pour le tube suivant, marqué "10 ^ -2." Mélanger ce tube ainsi.

4. Continuer ce modèle pour créer une série de dilution en série. Vous allez vous retrouver avec 9 tubes de 9 ml et 1 tube de 10 ml. Les charges virales dans vos tubes seront diluées allant de 10 fois (votre premier tube) ou 100 fois (votre second tube) dix milliards de fois (votre tube final).

Préparation des plaques

1. 
   
   
   

   Prenez 10 tubes de gélose molle de tryptone et 10 boîtes de Pétri et de les étiqueter pour correspondre avec vos tubes de dilution en série.

2. Desserrer les bouchons afin qu'ils ne sautent dans la chaleur et puis placez vos tubes de gélose dans un bécher d'eau bouillante. Cela va faire fondre la gélose de sorte que vous pouvez verser dans des boîtes de Pétri.

3. Transférez vos tubes à un ensemble de bain d'eau chaude à un minimum de 45 degrés Celsius. Cela permettra d'assurer que votre agar ne se solidifie pas dans les tubes avant vous avez une chance de le verser dans une boîte de Petri.

4. Ajouter deux gouttes de culture bactérienne à votre agar et mélanger délicatement. Ce sont les bactéries qui sera tué, vous permettant de compter le nombre de particules virales dans une solution particulière.

5. Ajouter 1 ml de chaque dilution en série à son tube de gélose correspondant tandis que les tubes sont encore dans le bain d'eau chaude. Par exemple, 1 ml de votre dilution 10 ^ -1 série devraient aller dans le tube étiqueté agar "10 ^ -1."

6. 
   
   
   

   Mélanger chaque tube, puis versez chaque tube dans la boîte de Petri avec l'étiquette correspondante. Cela va créer une mince couche d'agar qui a été inoculé avec des bactéries et des virus dans chaque plaque. Laissez les plaques se développent pendant la nuit dans un incubateur.

Compter et Calculer Les titres

1. Prenez vos plaques de l'incubateur et les examiner. Vous devriez voir les zones nuageuses à travers la plaque où les bactéries ont augmenté, sauf pour de petites taches claires appelées plaques. Ces plaques sont des plaques de bactéries mortes, et chaque plaque représente un virus.

2. Trouver une plaque qui a entre 30 et 300 plaques et de compter le nombre exact de plaques sur cette plaque.

3. Prenez le nombre de plaques dans votre assiette et multiplier par 10. Si vous avez compté 157 plaques, vous obtiendrez 1570.

4. Multiplier le nombre que vous avez obtenu à l'étape précédente par l'inverse du nombre de votre tube de dilution. Par exemple, si vous avez sélectionné la plaque était la plaque 10 ^ -5, vous multipliez 1570 par 10 ^ 5 pour obtenir 157000000. Ce nombre final est votre titre de virus, et représente le nombre de virus par ml de votre culture d'origine.

• Soyez prudent lorsque vous travaillez avec des virus. Tous les virus ne sont pas dangereux, mais vous devez prendre des précautions. Changez vos gants souvent. Essuyer immédiatement tout renversement et désinfecter la zone.