Bouillon nutritif liquide est utilisé pour la culture des bactéries telles que Escherichia coli. Recettes pour ce bouillon varient en fonction de l'espèce bactérienne et de la présence de modifications génétiques, par exemple la résistance aux antibiotiques. Le bouillon peut être solidifié par addition d'agar-agar, ce qui permet aux bactéries de former des colonies distinctes, alors que dans la culture liquide simplement qu'ils se dispersent dans tout le volume. Ceci est une technique de base, mais essentiel pour des méthodes avancées telles que le clonage de gène ou analyses microbiologiques. Cet article suppose que les souches de laboratoire d'Escherichia coli standards doivent être cultivées dans un bouillon Luria (LB) des plaques d'agar (ou boîtes de Pétri).
Peser 10 g de tryptone bactérienne de qualité, 5 g d'extrait de levure, 5 g de chlorure de sodium, 15 g d'agar-agar ou d'agarose, et une millilitre d'hydroxyde de sodium 1N. Mélanger ceux-ci avec un volume d'eau distillée stérile et passé à l'autoclave jusqu'à ce que 1 litre de milieu est obtenue. Autoclaver les médias dans des bouteilles ou flacons non hermétique pendant 25 minutes. Laisser refroidir à environ 50 degrés Celsius avant d'ajouter des réactifs qui seront détruits à haute température, tels que les antibiotiques ou d'autres suppléments nutritionnels.
Autoriser les médias autoclave refroidir à 50 degrés Celsius et non inférieure à 45 degrés Celsius, comme l'agar fixera dans son conteneur avant qu'il puisse être versé. Obtenir des boîtes de Pétri stériles et verser suffisamment pour couvrir l'ensemble de la surface de la plaque et au moins la moitié de sa profondeur. Éviter de trop remplir les plaques et de préférence ne permet pas l'agar pour contacter le bord supérieur du plat. Laisser les plaques à se solidifier dans un environnement stérile (par exemple sous une hotte à flux laminaire) en laissant les couvercles hors tension et à un coin de la hotte.
Sécher les plaques. Bien que les plaques peuvent être utilisées dès qu'elles sont définies, une certaine humidité est présent sur la surface de l'agar, ce qui empêchera colonies bactériennes d'adhérer suffisamment. Par conséquent, il est préférable de sécher les plaques avant l'application de toutes les bactéries, par exemple en les laissant reposer à la température ambiante pendant quelques jours ou pendant une demi-heure sous une hotte à flux laminaire ou dans un Celsius incubateur à 37 degrés.
Stocker les plaques. Plaques séchées doivent être empilés à l'envers (inversé) sur leurs couvercles et renvoyés dans leur emballage d'origine, scellés fermés et les envelopper dans du papier aluminium pour protéger de la lumière ou dans un récipient approprié. Toujours écrire la date de préparation sur les plaques et éviter d'utiliser si les plaques sont vieux de plus de deux mois.