Comment puis-je isoler les bactéries du sol?

Isoler les bactéries du sol est une première étape importante dans de nombreuses expériences de microbiologie. Une fois qu'ils sont isolés, les bactéries peuvent être analysés pour déterminer en outre choses, telles que les espèces et leur fonction dans l'environnement du sol. Même une petite quantité de sol peut contenir des millions de bactéries, ce qui rend nécessaire de diluer un échantillon de sol avant d'isoler les bactéries de l'échantillon.

Choses que vous devez

  • Eau distillée
  • Éprouvette graduée
  • Flacon stérile avec couvercle
  • échantillon de sol
  • 4 tubes à essai stériles plafonnés
  • 15 stériles de 1 ml. pipettes
  • Gélose nutritive préparée à environ 45 degrés C
  • 10 boîtes de Pétri stériles
  • Marqueur permanent

Instructions

  1. Mesurer 100 ml. l'eau distillée dans la colonne graduée et l'ajouter à la bouteille stérile.

  2. Peser 1 g de l'échantillon de sol et l'ajouter à la bouteille d'eau distillée. Fermer hermétiquement la bouteille et secouer pour bien mélanger la solution.

  3. Etiqueter les tubes à essai stériles "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5," et "10 ^ -6." Ajouter 9 ml d'eau distillée à chacun des tubes, avec l'une des pipettes.




  4. Transférer 1 ml de la solution dans la bouteille au tube étiqueté "10 ^ -3," en utilisant une nouvelle pipette. Boucher le tube et agiter doucement jusqu'à ce que la solution est bien mélangée.

  5. Transférer 1 ml de la solution dans le "10 ^ -3" tube à essai à la "10 ^ -4" tube avec une nouvelle pipette. Boucher le "10 ^ -4" tube et agiter pour mélanger. Répétez cette méthode pour transférer de la solution "10 ^ -4" tube à la "10 ^ -5" tube, puis à partir de la "10 ^ -5" tube à la "10 ^ -6" tube.

  6. Plate trois échantillons chacun à partir de la "10 ^ -4," "10 ^ -5" et "10 ^ -6" tubes. Utiliser une nouvelle pipette pour transférer 1 ml de solution du tube dans une boîte de Petri. Ajouter environ 15 ml de gélose nutritive à la plaquettes puis mettre le couvercle sur la plaque et agiter doucement afin que la gélose recouvre le fond de la plaque.




  7. Faire une plaque de commande en mettant 1 ml d'eau distillée dans une boîte de Pétri, en utilisant une nouvelle pipette. Ajouter agar mettre le couvercle sur la plaque et agiter.

  8. Laissez les boîtes de Pétri verticale jusqu'à ce que l'agar a mis. Puis inverser les plaques et incuber --- soit dans un incubateur ou à la température ambiante --- pour aussi peu que 24 heures et jusqu'à cinq jours.

  9. Retirer les plaques de l'incubateur après la quantité désirée de temps d'incubation. Compter les colonies bactériennes sur des plaques contenant environ 30 à 300 colonies. Utilisez un marqueur permanent pour marquer les colonies vous avez déjà compté pour éviter de compter deux fois les mêmes colonies.

  10. Diviser le nombre de colonies comptées par la dilution ---"10 ^ -4," "10 ^ -5" ou "10 ^ -6"--- De la solution du sol pour chaque plaque. Trouver le nombre de bactéries cultivables dans le programme original du sol par la moyenne des résultats de chaque plaque dénombrable.

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