Les gels d'agarose sont faites par des scientifiques travaillant dans les laboratoires de biologie moléculaire afin d'étudier des fragments d'ADN qui sont modifiés pendant le travail expérimental. La technique de fabrication des gels d'agarose est une compétence de routine et de base qui doit être maîtrisé par tous les scientifiques car elle permet la visualisation directe des différentes tailles d'ADN pour la vérification et d'autres projets de clonage de gènes. Alors que la préparation du gel est pas difficile, comme toutes les procédures de laboratoire, il ne doit être tenté par un professionnel formé scientifique en raison des risques biologiques impliqués.
Vérifiez que les plateaux de gel-casting ne disposent pas de fissures ou de tout ce qui peut causer agarose chaude une fuite. Nettoyez les plateaux en les essuyant avec 70% d'éthanol et laissez-les sécher soigneusement. Le plateau aura deux extrémités ouvertes et les deux extrémités scellées. Dans certains formats, des clips sont fournis avec ces plateaux pour fermer les extrémités, mais la plupart des plateaux doivent être scellés en plaçant des bandes de ruban à travers ces parties ouvertes. Appuyez sur la bande vers le bas dur et en toute sécurité, car ceux-ci se détacher du bac de plastique et laisser chaude agarose à fuir.
Sur la base de la taille du fragment d'ADN d'être séparé et analysé, déterminer le gel d'agarose en pourcentage approprié qui sera nécessaire. Par exemple, un gel d'agarose à 1 pour cent (poids sur volume) sera efficace pour l'analyse de 0,5 à 10 kilobases d'ADN de taille segments. Plus le pourcentage (à savoir plus d'agarose), le plus petit des fragments qui peuvent être séparés. Expériences de routine vont utiliser une gamme de 0,5 à 2 pour cent d'agarose. Pour un gel d'agarose à 1 pour cent, peser 1 gramme de poudre d'agarose sous une hotte chimique ou d'un autre système de confinement. Transférer cette précaution à la zone de préparation de gel de laboratoire.
Dans la zone de préparation de gel appropriée, mesurer 100 millilitres de tampon d'électrophorèse. Cela devrait être à la température ambiante. Transférer la poudre d'agarose dans un flacon résistant à la chaleur et versez dans le volume mesuré de tampon d'électrophorèse. Réchauffer doucement le mélange dans un four micro-ondes, mais ne permet pas de faire bouillir car l'évaporation va changer le pourcentage agarose présente. Assurez-vous que tous les agarose a dissous, tourbillonner pour bien mélanger, laisser refroidir très légèrement, puis passer à 0,5 microgrammes par millilitre de bromure d'éthidium. Ne pas respirer toute vapeur parce que cela va irriter les poumons et les muqueuses. En outre, ne pas réchauffer la solution après bromure d'éthidium a été ajouté. Agiter pour mélanger à nouveau, puis alors que la solution est encore assez chaud pour être versée, ce dans le plateau de gel préparé. Notez que si un grand volume d'échantillon, ou une faible concentration d'ADN est présent, un gel plus épais peut être faite. Cependant, gels minces seront plus faciles à analyser car ils vont photographier plus clairement.
Insérer les peignes de gel pour créer des fentes ou des puits de l'échantillon à charger. Laisser refroidir ce à la température ambiante pendant plusieurs heures, ou dans un réfrigérateur pendant plusieurs minutes. Dans ce dernier cas, une fois que le gel est fixé, il doit être observée pour tous les cristaux d'agarose. Habituellement, ceux-ci disparaissent si le gel est laissé à réchauffer à température ambiante en se reposant sur un banc pendant quelques minutes avant utilisation. Retirez délicatement les peignes de gel afin de ne pas déchirer le gel ou briser les puits. Le gel d'agarose est maintenant prêt à utiliser. Si elle n'a pas été utilisée immédiatement, il doit être enveloppé dans de la cellophane ou stocké dans un récipient en plastique dans un réfrigérateur pour éviter le gel de sécher ou de fusion.